《中华人民共和国农业行业标准》蔬菜上有机磷和氨基甲酸醋类农药残毒快速检测方法

1.范围

本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸醋类农药在蔬菜中的残毒快速检测方法。
本标准适用于叶菜类(除韭菜)、果菜类、豆菜类、瓜菜类、根菜类(除胡萝 卜、菱白等)中甲胺磷、氧化 乐果、对硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、杀扑磷、敌敌畏、克百威、涕灭威、灭多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲 蔡威、丙硫克百威、速灭威、残杀威、异丙威等的农药残毒快速检测

2 原理

    有机磷和氨基甲酸醋类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酞胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酞胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。加人反应试剂后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有机磷

或氨基甲酸酷类农药的残毒情况。即:
乙酞胆碱醋酶+有机磷或氨基甲酸醋类农药一 酶活性被抑制活性被抑制一 样本中含有机磷或氨基甲酸醋类农药乙酞胆碱醋酶+样本提取液 活性正常一 样本中不含有机磷或氨墓甲酸酷类农药如以乙酞硫代胆碱(AsCh)为底物，在乙酞胆碱酷酶(AChE)的作用下乙酞硫代胆碱(AsCh)水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸(DTNB)产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度410nm处有**吸收峰，用分光光度计可测得酶活性被抑制程度(用抑制率表示)。
3 试剂 pH8磷酸缓冲液。
4丁酞胆碱醋酶:根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，AA值控制在0.4-0.8之间
5 底物:碘化硫代丁酞胆碱(s-butyrylthiocholineiodide，即BTCD，用缓冲液溶解。

6显色剂:二硫代二硝基苯甲酸5〔,5-dithiobis(nitrobenzoicacid，即DTNB)，用缓冲液溶解

7 仪器了波长为4工。nm士3nn)专用速测仪，或可见光分光光度计。
中华人民共和国农业部2001一06-01批准                                          2001门0一01实施

8微型样品混合器
9台式培养箱
10可调移液枪:(10^1001,L,1-5ml)
概不锈钢取样器(内径2cm),
11 配套玻璃仪器及其他配件等。
12 检测门取样用不锈钢管取样器取来自不同植株叶片(至少8^10片叶子)的样本;果菜从表皮至果肉1- 1.5cm处取样。
检测过程
取2g切碎的样本(非叶菜类取4g),放人提取瓶内，加人20mL缓冲液，震荡1^-2min，倒出提取
液，静止3^-5min;于小试管内分别加人50IL酶,3mL样本提取液，50pL显色剂，于37-38C下放置
30min后再分别加人50ML底物，倒人比色杯中，用仪器进行测定。

检测结果计算
检测结果按式((1)计算:

式中:AA— 对照组3min后与3min前吸光值之差;

     AA,— 样本3min后与3min前吸光值之差。
抑制率)70%时，蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酷类农药残毒。此时样本要有2次以上重复检

测，几次重复检测的重现性应在80%以上

6最低检出浓度